High Pressure Liquid Chromatography atau HPLC

Dasar-dasar HPLC atau High Pressure Liquid Chromatography

Devinisi dari HPLC adalah salah satu jenis kromatografi dimana fase gerak berupa cairan dan menggunakan pompa tekanan tinggi/high pressure untuk peningkatan efisiensi pemisahan.

Tipe Senyawa	Mode	Fase Diam	Fase Gerak
1.       Netral 2.       Asam Lemah 3.       Basa Lemah	Reversed Phase	C18, C8, C4, Cyano, Amina	Air/Bahan Organik
1.       Ion 2.       Asam 3.       Basa	Pasangan Ion	C18, C8	Air/Bahan Organik Reagen Pasangan IOn
Senyawa yang tidak larut dalam air	Fase Normal	Silika, Amina, Cyano	Bahan Organik
Senyawa ion anorganik	Pertukaran Ion	Amino atau resin pertukaran ion	Larutan/Buffer
Senyawa polimer berbobot molekul tinggi	Eksclusi  ukuran	Polistiren Silika	Larutan Gel Filtrasi, Gel permeasi

Fase

~ Kromatografi Fase Normal

Fase diamnya bersifat polar kuat dan fase gerak bersifat non polar. Misal : Silica Gel.

Fase gerak : n-Hexane

~Kromatografi Fase Reversed

Fase diamnya bersifat non polar dan fase geraknya polar. Misal : Hidrokarbon

Fase gerak : Air

FASE GERAK

Sifat-sifat Fase Gerak :

1.Harus siap tersedia

2.Inert (Tidak bereaksi atau berpolimerisasi)

3.Tidak kental, viskositas rendah

4.Pelarut harus aman, tidak terbakar dan beracun

5.Fase diam tidak boleh bercampur dengan fase gerak dalam kromatografi cair partisi

PRINSIP HPLC

1.HPLC Isokratik

Tidak ada perubahan komposisi fase gerak, tidak ada perubahan suhu, tekanan atau aliran selama injeksi dan elusi di dalam kolom. Komposisi Fase geraknya tetap.

2.HPLC Gradient

Perlu perubahan komposisi dari fase gerak, perubahan suhu, tekanan, atau aliran selama elusi di dalam kolom.

PEMOMPAAN FASE GERAK

1.iSokratik

Aliran tetap dan konstant  dan perubahan  komposisi dari fase gerak terjadi

2.Elusi Gradien

Aliran konstant dan perubahan dari fase gerak terjadi

3.Flow Program

Aliran bervariasi dan ketetapan komposisi posisi dari fase gerak

CLICK coretan anak analis yang lain :
- Analisa Hidrigen Peroksida (H2O2) metode Permanganometri
- Analisa Barium (Ba) metode gravimetri